实时荧光定量PCR检测在食源性疾病主动监测中的应用及效果评价

摘要/Abstract

摘要：

目的为提高食源性致病菌的快速检测，探索实时荧光定量转录聚合酶链式反应法（real-time fluorescence reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR）在食源性疾病主动监测中的应用并评价其效果。方法收集2024年1—12月北京市哨点医院采集的食源性疾病主动监测患者的粪便样本，同时采用传统分离培养法和RT-PCR法检测沙门菌、副溶血性弧菌和弯曲菌，比较3种食源性致病菌RT-PCR法和传统分离培养法的检出阳性率，评价RT-PCR法在食源性致病菌检测中的应用价值。采用χ²检验、Kappa一致性检验和受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线等统计学方法分析检测结果的差异。结果 RT-PCR法检测沙门菌、副溶血性弧菌和弯曲菌的阳性率分别为4.31%、4.35% 和13.83%，分离培养法检测3种食源性致病菌的阳性率分别为5.13%、3.40%和8.00%，两者差异均有统计学意义（χ²=984.879、1350.890、857.971，均P<0.01）。与分离培养法相比，RT-PCR法检测沙门菌、副溶血性弧菌和弯曲菌的Kappa值分别为0.657、0.766和0.597。RT-PCR法检测沙门菌、副溶血性弧菌和弯曲菌的曲线下面积（AUC值）分别是0.858、0.843和0.746。结论 RT-PCR法检测沙门菌、副溶血性弧菌和弯曲菌的特异度高，真实性高，在食源性疾病主动监测中有应用价值，可将RT-PCR法与分离培养法联合应用，快速、准确的检测食源性致病菌，为食源性疾病事件的快速应对提供技术支撑。

关键词: 沙门菌, 副溶血性弧菌, 弯曲菌, 实时荧光定量转录聚合酶链式反应法, 食源性疾病

Abstract:

Objective To improve the rapid detection of foodborne pathogenic bacteria，the application of real-time fluorescence reverse transcription polymerase chain reaction（RT-PCR） in active surveillance of foodborne diseases was explored and its effect was evaluated. Methods Stool samples were collected from active monitoring diarrhea patients in sentinel hospitals in Beijing from January to December 2024. Salmonella，Vibrio parahaemolyticus and Campylobacter were detected by both traditional culture method and RT-PCR. The detection positive rates of three foodborne pathogenic bacteria were compared between RT-PCR and traditional culture method，and the application value of RT-PCR in foodborne pathogen detection was evaluated. Chi-square test，Kappa consistency test and receiver operating characteristic（ROC） curve were used to analyze the difference between the detection results. Results The positive rates of Salmonella，Vibrio parahaemolyticus and Campylobacter detected by RT-PCR method were 4.31%，4.35% and 13.83%，respectively. The positive rates of three foodborne pathogens detected by culture method were 5.13%，3.40% and 8.00%，respectively，and the differences in positive rates were statistically significant（χ²=984.879，1350.890，857.971，all P<0.01）. Compared with the culture method，the Kappa values of Salmonella，Vibrio parahaemolyticus and Campylobacter detected by RT-PCR method were 0.657，0.766 and 0.597，respectively. The area under the curve（AUC） of Salmonella，Vibrio parahaemolyticus and Campylobacter detected by RT-PCR method were 0.858，0.843 and 0.767，respectively. Conclusion The RT-PCR method has high specificity and authenticity in detecting Salmonella，Vibrio parahaemolyticus and Campylobacter，and has practical value in active monitoring of foodborne diseases. The RT-PCR method can be combined with culture methods to detect foodborne pathogens quickly and accurately，and provide technical support for the rapid response to foodborne disease events.

Key words: Salmonella, Vibrio parahaemolyticus, Campylobacter, Real-time fluorescence reverse transcription polymerase chain reaction, Foodborne diseases

中图分类号:

R115

王同瑜, 张鹏航, 刘玉竹, 王超, 张晓媛, 马晓晨. 实时荧光定量PCR检测在食源性疾病主动监测中的应用及效果评价. [J]职业与健康, 2026, 42(10): 1333-1336.

WANG Tongyu, ZHANG Penghang, LIU Yuzhu, WANG Chao, ZHANG Xiaoyuan, MA Xiaochen. Application and evaluation of RT-PCR detection in active surveillance of foodborne diseases. [J]OCCUPATION AND HEALTH, 2026, 42(10): 1333-1336.

图/表 4

参考文献 15

[1]	陈艳, 严卫星. 国内外急性胃肠炎和食源性疾病负担研究进展[J]. 中国食品卫生杂志, 2013, 25(2):190-193.
[2]	HAVELAAR A H, KIRK M D, TORGERSON P R, et al. World Health Organization global estimates and regional comparisons of the burden of foodborne disease in 2010[J]. PLoS Med, 2015, 12(12):e1001923. DOI URL
[3]	徐奋奋, 金晓霞, 黄亚琴. 食源性疾病监测中副溶血性弧菌现场快速检测方法的建立与应用[J]. 中国卫生检验杂志, 2017, 27(21):3089-3091.
[4]	王艳, 李洁群. 实时荧光定量PCR法在食源性致病菌检测中的应用效果[J]. 医疗装备, 2024, 37(19):58-60.
[5]	高颖. 实时荧光定量PCR法与常规细菌鉴定法在肠道致病菌检测中的应用效果对比分析[J]. 中国医药指南, 2021, 19(14):126-127.
[6]	ZHOU B L, XIAO J W, LIUS F, et al. Simultaneous detection of six food-borne pathogens by multiplex PCR with a GeXP analyzer[J]. Food Control, 2013, 32(1):198-204. DOI URL
[7]	KIM G, MOON J H, MOH C Y, et al. A microfluidic nano-biosensor for the detection of pathogenic salmonella[J]. Biosens Bioelectron, 2015, 67: 243-247. DOI PMID
[8]	LANDIS J R, KOCH G G. The measurement of observer agreement for categorical data[J]. Biometrics, 1977, 33(1):159-74. PMID
[9]	SONG S, HAN L, CHEN M, et al. Recent progress in nanomaterial-based fluorescence assays for the detection of food-borne pathogens[J]. Sensors(Basel), 2024, 24(23):7715.
[10]	韩毅, 孙燕萍, 周虹, 等. 实时荧光定量PCR法与分离培养法检测食品从业人员沙门菌和志贺菌的比较研究[J]. 中国食品卫生杂志, 2015, 27(2):132-135.
[11]	田梅, 沈静. 实时荧光定量PCR法与常规细菌鉴定法检测肠道致病菌的比较[J]. 中国微生态学杂志, 2015, 27(10):1221-1223,1237.
[12]	李轩, 汪淑颖, 向红. 人类弯曲菌病感染来源研究进展[J]. 中国人兽共患病学报, 2022, 38(3):266-276. DOI
[13]	World Health Organization. The global view of campylobacteriosis: Report of an expert consultation[EB/OL].(2012-07-09)[2025-03-30]. http://apps.who.int//iris/handle/10665/80751.
[14]	张鹏航, 张晓嫒, 刘玉竹, 等. 2016—2018年北京市腹泻患者弯曲菌耐药性与脉冲场凝胶电泳分子分型的研究[J]. 食品安全质量检测学报, 2021, 12(4):1435-1442.
[15]	李芬. 实时荧光定量PCR法与常规细菌鉴定法检测肠道致病菌的对比研究[J]. 现代诊断与治疗, 2018, 29(11):1808-1809.

病原体	人数	性别[人（%）]		年龄[（$\bar{x} \pm s$）岁]	分离培养法阳性[人（%）]	RT-PCR法阳性[人（%）]	双阴性[人（%）]
病原体	人数	女	男	年龄[（$\bar{x} \pm s$）岁]	分离培养法阳性[人（%）]	RT-PCR法阳性[人（%）]	双阴性[人（%）]
沙门菌	2 298	1 048（45.60）	1 250（54.40）	38.27±20.81	118（5.13）	99（4.31）	2 154（93.73）
副溶血性弧菌	2 297	1 048（45.62）	1 249（54.38）	38.29±20.80	78（3.40）	100（4.35）	2 188（95.25）
弯曲菌	2 213	1 012（45.73）	1 201（54.27）	38.29±20.78	177（8.00）	306（13.83）	1 884（85.13）

病原体	人数	性别[人（%）]		年龄[（$\bar{x} \pm s$）岁]	分离培养法阳性[人（%）]	RT-PCR法阳性[人（%）]	双阴性[人（%）]
病原体	人数	女	男	年龄[（$\bar{x} \pm s$）岁]	分离培养法阳性[人（%）]	RT-PCR法阳性[人（%）]	双阴性[人（%）]
沙门菌	2 298	1 048（45.60）	1 250（54.40）	38.27±20.81	118（5.13）	99（4.31）	2 154（93.73）
副溶血性弧菌	2 297	1 048（45.62）	1 249（54.38）	38.29±20.80	78（3.40）	100（4.35）	2 188（95.25）
弯曲菌	2 213	1 012（45.73）	1 201（54.27）	38.29±20.78	177（8.00）	306（13.83）	1 884（85.13）

病原体	RT-PCR 法	分离培养法		Kappa值	Z值	P值	检出不一致率（%）
病原体	RT-PCR 法	阳性	阴性	Kappa值	Z值	P值	检出不一致率（%）
沙门菌	阳性	73（3.18）	26（1.13）	0.657	31.616	<0.001	3.09
	阴性	45（1.96）	2 154（93.73）
副溶血性弧菌	阳性	69（3.01）	31（1.35）	0.766	37.037	<0.001	1.74
	阴性	9（0.39）	2 188（95.25）
弯曲菌	阳性	154（6.96）	152（6.87）	0.597	29.405	<0.001	7.91
	阴性	23（1.04）	1 884（85.13）

病原体	RT-PCR 法	分离培养法		Kappa值	Z值	P值	检出不一致率（%）
病原体	RT-PCR 法	阳性	阴性	Kappa值	Z值	P值	检出不一致率（%）
沙门菌	阳性	73（3.18）	26（1.13）	0.657	31.616	<0.001	3.09
	阴性	45（1.96）	2 154（93.73）
副溶血性弧菌	阳性	69（3.01）	31（1.35）	0.766	37.037	<0.001	1.74
	阴性	9（0.39）	2 188（95.25）
弯曲菌	阳性	154（6.96）	152（6.87）	0.597	29.405	<0.001	7.91
	阴性	23（1.04）	1 884（85.13）

病原	特异度	灵敏度	准确性	阴性预测值	阳性预测值	约登指数	AUC（95%CI）
沙门菌	0.980	0.737	0.969	0.988	0.619	0.717	0.858（0.815~0.902）
副溶血性弧菌	0.996	0.690	0.983	0.986	0.885	0.686	0.843（0.797~0.889）
弯曲菌	0.988	0.503	0.921	0.925	0.870	0.491	0.746（0.717~0.774）